Hay muchos héroes anónimos a nuestro alrededor, que parecen normales, pero en realidad contribuyen mucho en silencio a nosotros.La proteinasa K es el "héroe anónimo" en la industria del diagnóstico molecular, aunque en comparación con los "grandes y poderosos" de la industria, la proteinasa K es tan discreta que durante mucho tiempo hemos pasado por alto su importancia.Con el estallido de la nueva epidemia de la corona, la demanda de proteinasa K se ha disparado y la oferta nacional y extranjera está muy por detrás del consumo, y de repente todos se dieron cuenta de que la proteinasa K es muy importante.
¿Para qué sirve la proteinasa K?
La proteinasa K es una serina proteasa con actividad enzimática proteolítica y puede mantener la actividad en una amplia gama de entornos (pH (4-12,5), tampón con alto contenido de sal, temperatura alta de 70 °C, etc.).Además, la actividad de la proteinasa K no se inhibe con SDS, urea, EDTA, clorhidrato de guanidina, isotiocianato de guanidina, etc., y una cierta cantidad de detergente también puede mejorar la actividad de la proteinasa K. En el tratamiento médico (desinfección viral y microbiana ), alimentos (ablandamiento de carne), cuero (ablandamiento del cabello), vinificación (clarificación de alcohol), preparación de aminoácidos (plumas degradadas), extracción de ácidos nucleicos, hibridación in situ, etc., proteinasa K Hay aplicaciones.La aplicación más utilizada es la extracción de ácidos nucleicos.
La proteinasa K puede enzimolizar todo tipo de proteínas en la muestra, incluidas aquellas histonas que están estrechamente unidas a los ácidos nucleicos, de modo que los ácidos nucleicos puedan liberarse de la muestra y liberarse en el extracto, facilitando el siguiente paso de extracción y purificación.En la detección de ácido nucleico viral, la proteinasa K es uno de los componentes importantes de la solución de muestreo de virus.La proteinasa K puede descifrar e inactivar la proteína de la cubierta del virus, lo que es más seguro durante la etapa de transporte y detección;Además, la proteinasa K también puede degradar la RNasa, previene la degradación del ARN viral y facilita la detección de ácidos nucleicos.
La fama de la noche a la mañana de la proteinasa K
Ya sea en el campo de la investigación científica o en el campo del DIV, la extracción de ácido nucleico es el experimento más básico, por lo que la proteinasa K siempre ha sido una existencia muy importante.Sin embargo, en el pasado, la proteinasa K era mucho menos conocida que su función.Gran parte de esto se debió a que la relación de oferta y demanda de proteinasa K era muy estable.Pocas personas pensarían que el suministro de proteinasa K sería un problema.
Con el estallido de la nueva epidemia de la corona, ha aumentado la demanda de pruebas de ácido nucleico.A finales de junio de 2020, China ha completado casi 90 millones de nuevas pruebas de coronas, y esta cifra es aún más alarmante a escala mundial.En experimentos de extracción de ácidos nucleicos, la concentración de trabajo de proteinasa K es de aproximadamente 50 a 200 μg/ml.Generalmente, se necesitan alrededor de 100 μg de proteinasa K para extraer una muestra de ácido nucleico.En el uso real, para aumentar la eficacia de la extracción de ácidos nucleicos, a menudo se utilizará Proteinasa K en una cantidad mayor.La detección del ácido nucleico del nuevo coronavirus ha generado una gran demanda de proteinasa K.El equilibrio original entre oferta y demanda de proteinasa K se rompió rápidamente y la proteinasa K se convirtió de la noche a la mañana en un importante material de prevención de epidemias.
Dificultades en la producción de proteinasa K.
Aunque con el desarrollo de la epidemia, la gente ha valorado el importante valor de la proteinasa K, es vergonzoso que debido a la excesiva discreción de la proteinasa K, pocas empresas nacionales hayan participado en la producción de proteinasa K. Cuando la gente Quiero establecer la producción de proteinasa K. Durante el proceso de producción, se descubrió que la proteinasa K es una proteína extremadamente especial.Es un gran desafío ampliar la capacidad de producción de proteinasa K en un corto período de tiempo.
La producción a gran escala de proteinasa K enfrenta las siguientes dificultades
1. Baja expresión
La proteinasa K puede degradar de manera no específica la mayoría de las proteínas y causar una toxicidad grave en la célula huésped de expresión.Por tanto, el nivel de expresión de la proteinasa K es generalmente muy bajo.La detección de sistemas de expresión y cepas que expresan altamente la proteinasa K generalmente requiere un ciclo más largo.
2. Residuos de pigmentos y ácidos nucleicos.
La fermentación a gran escala introduce una gran cantidad de pigmentos y residuos de ácidos nucleicos del huésped.Es difícil eliminar estas impurezas con un proceso de purificación simple y la purificación compleja aumenta el costo y reduce la tasa de recuperación.
3. Inestabilidad
La proteinasa K no es lo suficientemente estable, puede enzimolizarse a sí misma y es difícil almacenarla de manera estable a 37°C durante mucho tiempo sin un agente protector.
4. Fácil de precipitar
Al preparar el polvo liofilizado de proteinasa K, para garantizar que el contenido sólido de proteinasa K en el polvo liofilizado sea grande, es necesario agregar un agente protector liofilizado en una concentración alta, pero cuando el La concentración de proteinasa K alcanza 20 mg/ml y más, es fácil que la agregación forme un precipitado, lo que plantea grandes dificultades para la liofilización de la proteinasa K con un alto contenido de sólidos.
5. Gran inversión
La proteinasa K tiene una fuerte actividad proteasa y puede hidrolizar otras proteasas en el laboratorio.Por lo tanto, la proteinasa K requiere áreas de producción, equipos y personal especializados para la investigación, el desarrollo y la producción.
Solución de proteinasa K de XD BIOCHEM
XD BIOCHEM tiene una plataforma de purificación y expresión de proteínas maduras y tiene una rica experiencia en la expresión y purificación de proteínas recombinantes y la optimización de procesos de producción.Gracias a la rápida formación de un equipo de investigación y desarrollo, se ha superado el proceso de producción a gran escala de la proteinasa K.La producción mensual de polvo liofilizado es de más de 30 KG.El producto tiene un rendimiento estable, una alta actividad enzimática específica y no contiene residuos de citocromo ni de ácido nucleico del huésped.Bienvenido a contactar XD BIOCHEM Obtenga un paquete de prueba (correo electrónico:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
Las soluciones técnicas de XD BIOCHEM incluyen
Utilizando la integración de plásmidos de copias múltiples, se seleccionan cepas de alta expresión con un nivel de expresión de 8 g/l, lo que supera el problema del bajo nivel de expresión de la proteinasa K.
Mediante el establecimiento de un proceso de purificación de varios pasos, el citocromo del huésped y los residuos de ácido nucleico de la proteinasa K se eliminaron con éxito por debajo del valor estándar.
Mediante una selección de alto rendimiento de formulaciones de tampón protector, se seleccionó un tampón que puede almacenar de forma estable la proteinasa K a 37 °C.
Los tampones de detección superan el problema de que la proteinasa K es fácil de agregar y precipitar en altas concentraciones, y sientan las bases para la liofilización con alto contenido de sólidos de la proteinasa K.
Muestra de proteinasa K XD BIOCHEM
Prueba de estabilidad de la proteinasa K XD BIOCHEM: no habrá cambios significativos en la actividad después de 80 días a temperatura ambiente
Prueba de estabilidad de la proteinasa K XD BIOCHEM: no habrá cambios significativos en la actividad después de 80 días a temperatura ambiente.
Comparación del efecto de extracción de ácidos nucleicos de la proteinasa K de XD BIOCHEM y productos de la competencia.En el proceso de extracción de ácidos nucleicos se utilizan XD BIOCHEM y proteinasa K competitiva respectivamente.La eficiencia de extracción de la proteinasa K de XD BIOCHEM es mayor y el valor de Ct del gen diana es menor.
Hora de publicación: 31-dic-2021