4-Nitrofenil beta-D-galactopiranósido CAS:200422-18-0

Efecto: El ONPG es un sustrato que se utiliza específicamente para detectar la presencia y la actividad de la enzima β-galactosidasa. Cuando la enzima β-galactosidasa está presente y activa, hidroliza el ONPG en dos productos: o-nitrofenol y un derivado de galactosa. La liberación de o-nitrofenol produce un cambio de color a amarillo, que puede medirse con un espectrofotómetro.

Aplicación: ONPG tiene diversas aplicaciones en la investigación en biología molecular y bioquímica:

Determinación de la actividad de la β-galactosidasa: El ONPG se utiliza comúnmente para medir y cuantificar la actividad de la enzima β-galactosidasa. La velocidad de formación de o-nitrofenol, que es directamente proporcional a la actividad enzimática, puede medirse espectrofotométricamente.

Expresión y regulación génica: ONPG se utiliza frecuentemente en experimentos relacionados con estudios de expresión y regulación génica. Se emplea a menudo en ensayos de proteínas de fusión, como el sistema de fusión lacZ, comúnmente utilizado, para estudiar la expresión de genes bajo el control de promotores específicos. La actividad de la beta-galactosidasa medida con ONPG proporciona información sobre el nivel de expresión génica.

Detección de la actividad de la β-galactosidasa: ONPG puede utilizarse como método de cribado colorimétrico en tecnología de ADN recombinante para identificar la presencia y funcionalidad del gen LacZ, que codifica la β-galactosidasa. Este método de cribado ayuda a identificar clones que contienen el gen de interés.

Estudios de cinética enzimática: ONPG también resulta útil para estudiar la cinética de la enzima β-galactosidasa. Al medir la velocidad de reacción enzima-sustrato a diferentes concentraciones de sustrato, es posible determinar parámetros cinéticos como las constantes de Michaelis-Menten (Km) y las velocidades máximas de reacción (Vmax).