¿Cómo determinar la concentración óptima?
Para el inductor IPTG (isopropil-beta-d-tiogalactósido), cuanto mayor sea la concentración, mejor.La concentración óptima depende de las condiciones experimentales específicas y del efecto de inducción deseado.
Generalmente, la concentración de IPTG se utiliza en el intervalo de 0,1 a 1 mM.Concentraciones más bajas pueden reducir los efectos adversos sobre el crecimiento celular y pueden reducir la citotoxicidad debido a la sobreexpresión de proteínas diana.Concentraciones más altas pueden causar una carga metabólica celular excesiva, afectando el crecimiento celular y la eficiencia de la expresión.
La forma de determinar la concentración óptima puede ser evaluar el nivel de expresión de la proteína diana realizando pruebas de inducción de IPTG a diferentes concentraciones.Se pueden realizar pruebas de cultivo a pequeña escala utilizando una variedad de concentraciones de IPTG (por ejemplo, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) y el efecto de expresión a diferentes concentraciones se puede evaluar detectando el nivel de expresión de la proteína diana (por ejemplo, Western transferencia o detección de fluorescencia).Según los resultados experimentales, se seleccionó como concentración óptima la concentración con el mejor efecto de expresión.
Además, también puede consultar la literatura relevante o la experiencia de otros laboratorios para comprender el rango de concentración de IPTG comúnmente utilizado en condiciones experimentales similares y luego optimizarlo y ajustarlo de acuerdo con las necesidades experimentales.
Es importante tener en cuenta que la concentración óptima puede variar dependiendo de los diferentes sistemas de expresión, proteínas objetivo y condiciones experimentales, por lo que es mejor optimizar caso por caso.
Hora de publicación: 28 de septiembre de 2023